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細胞凋亡試劑盒的常見誤區

更新時間:2025-06-19  |  點擊率:69
  細胞凋亡試劑盒,特別是TUNEL細胞凋亡試劑盒,在使用過程中存在一些常見誤區。以下是對這些誤區的詳細分析:
  一、樣本處理不當
  1.固定不充分或固定液選擇不當
  -誤區:未使用推薦的固定液(如4%多聚甲醛)進行固定,或固定時間不足。
  -分析:固定不充分會導致細胞結構不穩定,影響后續標記效率。乙醇等固定液對組織的滲透力較弱,不推薦使用。
  2.切片過厚
  -誤區:樣本切片過厚,導致標記染色不充分。
  -分析:切片過厚會增加標記染色的難度,降低檢測靈敏度。應使用適當的切片厚度,以便標記染色充分。
  3.脫蠟/水化不充分
  -誤區:對于石蠟切片,脫蠟/水化步驟不充分。
  -分析:脫蠟/水化不充分會導致染料無法充分滲透到樣本中,影響檢測結果。應確保脫蠟/水化步驟充分進行。
  二、標記染色操作不當
  1.標記染色時間過短
  -誤區:標記染色時間過短,未達到推薦的孵育時間。
  -分析:標記染色時間過短會導致標記不充分,熒光信號弱或無信號。應確保標記染色時間達到推薦的孵育時間。
  2.TdT酶或熒光素/酶標記的dUTP濃度過低
  -誤區:未按照說明書推薦的比例配制標記工作液,導致濃度過低。
  -分析:濃度過低會降低標記效率,影響檢測結果。應嚴格按照說明書推薦的比例配制標記工作液。
  3.TdT酶失活
  -誤區:標記工作液配制后長時間保存,導致TdT酶失活。
  -分析:TdT酶失活會導致標記無法進行,熒光信號弱或無信號。標記工作液應現配現用,不宜長期保存。
 

 

  三、非特異性染色與假陽性
  1.固定液濃度過高或作用時間過長
  -誤區:使用高濃度固定液或固定時間過長,導致DNA鏈不規則斷裂。
  -分析:高濃度固定液或固定時間過長會導致細胞自溶、DNA鏈不規則斷裂,產生假陽性。應使用適當的固定液濃度和固定時間。
  2.蛋白酶K處理不當
  -誤區:蛋白酶K處理時間過長或濃度過大,破壞核酸結構。
  -分析:蛋白酶K處理不當會導致核酸結構破壞,出現假陽性。應適當調整蛋白酶K的處理時間和濃度。
  3.樣本中酶活性水平較高
  -誤區:未對酶活性水平較高的樣本進行充分固定。
  -分析:如平滑肌細胞或組織中DNA酶或DNA聚合酶的活性水平較高,易發生非特異性的熒光標記。取得這些細胞或組織后需立即充分固定。
  四、熒光檢測操作不當
  1.曝光時間過長
  -誤區:熒光拍照時曝光時間過長,導致背景熒光過強。
  -分析:曝光時間過長會導致背景熒光過強,掩蓋真實信號。應調整曝光條件,先對陰性組調整到無背景光,再用這個曝光條件去拍攝實驗組。
  2.未避光操作
  -誤區:標記與檢測樣本時未避光操作。
  -分析:熒光易淬滅,未避光操作會導致熒光信號減弱。應在避光條件下進行標記與檢測樣本的操作。
  細胞凋亡試劑盒在使用過程中需要特別注意樣本處理、標記染色操作、非特異性染色與假陽性以及熒光檢測操作等方面的問題。遵循說明書推薦的操作步驟和注意事項,可以有效避免這些誤區,提高檢測結果的準確性和可靠性。
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